ELISA實驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應用，但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結果。選擇試劑時，應選擇質量優良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。

ELISA加樣步驟的常見問題：
    ①：過長(特別是室內溫度較高時)；
    ②：手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間；
    ③：加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。.血清或血漿標本分離不好即進行加樣。
 

對應解決方法：
    ①：標本為血清，將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內。
    ②：加樣后及時放入孵箱。
    ③：加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
    ④：如果采用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
    ⑤：標本較多時，請分批操作。
               
        ELISA試劑盒在實際操作中，除了選擇優良試劑外，必須嚴格按照操作步驟進行操作，同時作好室內質控、室間質評，以嚴謹的工作作風檢測每一份標本，才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀，這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。