噬菌體在微生物界同樣存在類似動(dòng)植物界的食物鏈一樣的關(guān)系，噬菌體滴度是如何測(cè)定的呢？再次與朋友見(jiàn)面就已經(jīng)是2014年了，我公司的跨年*也已經(jīng)圓滿的結(jié)束了，而現(xiàn)在才是新年的開(kāi)始，購(gòu)我公司產(chǎn)品立送精美臺(tái)歷一個(gè)哦！下面來(lái)看看今天上海恒遠(yuǎn)為您特別分享：測(cè)定噬菌體滴度的方法。

    在宿主細(xì)胞過(guò)量的情況下，噬斑的數(shù)量隨著噬菌體的增加呈線性增加。由于這個(gè)原因，在感染以前，要將噬菌體進(jìn)行稀釋，而不是將宿主細(xì)胞稀釋。以低MOI(感染重復(fù)性)鋪板，也可確保每一個(gè)噬斑僅包含一個(gè)DNA。 

材料和試劑：
1、微波爐；
2、LB/IPTG/Xgal培養(yǎng) 板；
3、lb培養(yǎng)基；
4、頂層瓊脂糖凝膠。

操作步驟：
1、在5~10ml LB培養(yǎng)基中接種單個(gè)ER2537克隆，振搖孵育直至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)中期(OD600~0.5)。
2、在細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)，微波融化頂層瓊脂糖凝膠，分裝至無(wú)菌培養(yǎng)管內(nèi)，每管3ml。維持在45℃?zhèn)溆谩?br>3、37℃預(yù)熱LB/IPTG/Xgal培養(yǎng)板，備用。
4、以LB培養(yǎng)基10倍比稀釋噬菌體。
建議稀釋范圍：對(duì)擴(kuò)增的噬菌體培養(yǎng)上清，108-1011;對(duì)未擴(kuò)增的篩選洗脫液，101-104。每次稀釋都換用新的加樣槍頭，使用氣溶膠阻隔槍頭以避免交叉污染。
5、一旦ER2537培養(yǎng)物長(zhǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)中期，分裝至微量離心管中，每管200ml。
6、將倍比稀釋的噬菌體上清加入含細(xì)菌培養(yǎng)物的微量離心管中，一支微量離心管中僅加入一種稀釋液10ml，快速渦旋，室溫孵育1-5min。
7、轉(zhuǎn)移至含有45℃頂層瓊脂糖凝膠的管中，快速渦旋混勻，立即傾倒至預(yù)熱的LB/IPTG/Xgal平板上，輕緩搖動(dòng)平板使頂層膠均勻分布。
8、冷卻平板5min，37℃倒置培養(yǎng)過(guò)一個(gè)夜。
9、噬斑計(jì)數(shù)以噬斑數(shù)為100左右的平皿為準(zhǔn)，噬斑數(shù)乘以稀釋度即可獲得每10ml噬菌體的滴度-噬斑形成單位(pfu)。

    朋友們，以上就是測(cè)定噬菌體滴度的方法啦，測(cè)定試驗(yàn)過(guò)后記得把結(jié)果與心得記錄下來(lái)哦！這里是上海恒遠(yuǎn)ELISA試劑盒供應(yīng)商，感謝朋友們對(duì)我公司的支持！